实验步骤
1、血培养瓶经 12-18 h 35℃ 孵育后,在血平板或巧克力平板上盲目传种一次。这种方法可提早检出阳性标本。
2、盲目传种后,培养瓶继续孵育至第 7 天,每日早晨取出检查有无生长,并摇匀培养液续孵。下列几种情况提示细菌生长。
(1)均匀混浊,发酵葡萄糖产生气泡。
(2)微混浊有绿色变化。
(3)血球层上面出现颗粒状或絮状沉淀物生长,或自下而上的严重溶血。
(4)混浊并有胶冻状凝固,瓶壁有颗粒状粘附。
(5)表面有菌膜,菌环状生长,下呈混浊。
3、肉眼见有细菌生长,做如下处理:
(l)取生长物涂片,做革兰氏染色。
(2)取生长物做药敏试验(直接试验)。
(3)取生长物做相应的生化鉴定。
(4)取生长物移种血平板,巧克力和中国兰/麦康凯/伊美兰平板。根据革兰氏染色所见结果应及时报告临床医师。
根据革兰氏染色的结果,以培养瓶内培养液为菌液,做直接法药物敏感性测定,争取在较短时间内得出初步结果,供临床医师作为治疗的参考。标本经平板分离纯培养后,做标准化药敏试验,正式报告给临床医师。
涂片结果证实为一种细菌生长,则可直接以增菌液做鉴定试验。如有二种或多种细菌同时生长,则必须经过分离培养,以获得纯菌后做鉴定。
4、无细菌生长表现的培养瓶,在观察的 7 天中,最少应作 2 次盲目传种。7 天仍未见生长,报告阴性。如可疑布氏杆菌时可培养 28天,可疑军团病菌时可培养 10 天。
5、需氧菌培养可转种到血平板或巧克力平板。用血平板可观察到细菌溶血的情况,但可能丢失嗜血杆菌。如用巧克力平板,不仅嗜血杆菌可生长,脑膜炎奈瑟菌生长也好。转种巧克力平板需放CO2 环境中。