1、一般细菌涂片检查:挑选痰液中脓性或带血部分,涂成均匀薄片,行革兰氏染色,镜检。
根据其细菌形态,排列和染色性,大致可以初步推定菌属(或种)如镜见排列成葡萄状的革兰氏阳性球菌,可报告为:「找到革兰氏阳性球菌,形似葡萄球菌」;如见到爪子仁形或矛头状的尖端相背,成双排列,具有明显荚膜的革兰氏阳性球菌时,可报告为:「找到革兰氏阳性双球菌,形似肺炎链球菌」;如查见短而粗的革兰氏阴性杆菌,排列多成双且有明显荚膜时,可报告为:「找到革兰氏阴性杆菌形似肺炎克雷佰菌」;如查见不易识别的细菌,则报告为:「找到革兰氏×性×形细菌。
2、培养
(1)痰培养前的处理:由于痰含有正常菌群,影响病原菌的检出,采用以下方法以减少正常菌群。将痰加入含有 15-20 ml灭菌生理盐水的试管中,剧烈振荡 5-10s,然后用接种环将沉淀于管底的脓痰小片沾出,再放入另一试管内,以同样的方法反复二次,最后将剩余的脓痰接种在培养基上。
(2)选择培养基:下呼吸道的病原菌种类繁多,除一般细菌外,还有结核菌、真菌、厌氧菌等。所以,除基本分离培养外,还须用特殊培养基和适当的培养环境。一般须用以下几种分离方法。
a)血平板:适用于分离各类细菌,特别是β溶血性链球菌、葡萄球菌。血平板放 CO2 或厌氧环境易于分离肺炎链球菌和β溶血性链球菌。
b)巧克力平板于 CO2 环境下分离嗜血杆菌,脑膜炎奈瑟氏菌。
其它:TTC-沙保弱氏培养基,改良罗氏培养基,厌氧环境等。
3、报告方式:
检出致病菌时,除报告该菌的鉴定名称外,还需同时报告正常菌群的情况。通常以报告草绿色链球菌和奈瑟氏菌作为正常菌群存在的指标。报告的各种细菌应该注明各自所占比例情况,以「+」号表示。如草绿色链球菌(+),奈瑟氏菌(+),肺炎克雷伯氏菌(++)。此报告表明肺炎克雷伯氏菌在数量上多于正常菌群,诊断为病原菌。未检出致病菌时,应报告「正常菌群」。