1. 将显影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盘中。
(1)1个盘:pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液,所配的25倍稀释的吉姆萨染液。
(2)3个盘:水。
(3)脱水系列溶液:
①3个盘:分别盛50%、70%和95%乙醇。
②2个盘:盛有100%乙醇。
③3个盘:盛有二甲苯。
3. 在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s(依染色时间决定染色的强弱),将玻片在水中浸泡3次,每次2 min。
4. 连续用乙醇脱水系列溶液处理,每盘中浸泡2 min,将玻片移至二甲苯盘中,毎次浸泡2 min,共3次。
4. 连续用乙醇脱水系列溶液处理,每盘中浸泡2 min,将玻片移至二甲苯盘中,毎次浸泡2 min,共3次。
5. 在通风橱中,按如下操作压片固定:用一平头镊(拿在左手),从二甲苯中取出一块玻片,夹住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端(切片所处位置),左手拿一干净的盖玻片,很缓慢地放在载玻片上(在加压片固定介质和盖玻片前,勿使玻片变干,因微小气泡会造成人为假象)。
6. 用3MM 滤纸,沿盖玻片边缘,小心吸去多余固片介质/二甲苯,并擦拭载玻片背面(勿擦拭盖玻片)。
7. 将玻片平放于一硬纸盒盘上,置42℃温孵箱2天使之凝固。
8. 以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳,染料及固片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒,必要时,载玻片上再注明标签。
9. 显微镜观察玻片,观察时可依信号强弱,调节光亮。
注意事项
1. 勿将玻片直立存放于玻片中,因此时固片介质尚未凝结。