一、试剂配制

1 mM HEPES的配制：称取0.119 g HEPES（MW 238.3）粉末，加水溶解，定容至500 ml，用NaOH调pH至7.0，灭菌后待用。

二、实验步骤

1.  挑取单克隆接种于2 ml YEP（含50 mg/l链霉素）液体培养基，28℃，250 rpm，振荡培养过夜。（如用5 mlYEP，需培养36 h）

2.  将菌液按1:100转移至200 ml YEP（含50 mg/l链霉素）培养液中，28℃，250 rpm，振荡培养至OD=0.3(约4~5 h)。

3.  转入50 ml的无菌离心管，4℃，4 000 rpm离心10 min，弃上清。

4.   用20 ml冰浴的HEPES(1 mM，PH7.0)重悬。

5.  4℃，4 000 rpm离心10 min，弃上清。

6.  重复4、5步骤2~3次。

7.  用2 ml冰浴的10%甘油重悬。

8.  每管100 μl分装于1.5 ml无菌的Eppendorf管中，-70℃保存。

注意事项

1.  HEPES需现用现配。