1.将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul;
2.加5.5ul新鲜配制的3M NaOH;
3. 42℃水浴30min;
水浴期间配制:
4.10mM对苯二酚(氢醌),加30ul至上述水浴后混合液中;(溶液变成淡黄色)
5. 3.6M亚硫酸氢钠(Sigma,S9000),配制方法:1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释,并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0,最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶,但加入NaOH后会慢慢溶解,需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。
6.EP管外裹以铝箔纸,避光,轻柔颠倒混匀溶液。
7.加200 ul 石蜡油,防止水分蒸发,限制氧化。
8.50℃避光水浴16h。