MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因 组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳,凝胶扫描观察分析结果。
1. 在50 μl 体系中,DNA(2~5 μg)经NaOH(终浓度值0.2 mol/L)在37℃变性10 Min。
2. 对于ng级别的人基因组DNA,在进行修饰前加入2μg蛙鱼精DNA为载体。
3. 加入30 μl 刚配制好的10 mmo/L 氢醌与520/1的40.5%亚硫酸氢钠混匀。
4. 然后用石蜡油隔绝空气的条件下,避光在50%温育16 h。
5. 修饰后的DNA过WizerdDNA纯化柱,用50/1 L 水洗脱。
6. 室温下用NaOH(终浓度为0.3 mol/L)修饰5 min,之后用乙醇沉淀。
7. DNA溶于20 μl 水中,立即使用或在-20℃保存。