1. 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备电泳分离放射性标记的瞵酸化蛋白质，电转移至PVDF膜上。
2. 用水充分洗膜，用1 000 ml 水洗3次，每次2 min。
3. 塑料容器内，用足够的1 mol/l KOH浸过膜，在55℃烤箱或水浴锅內温育120 min。
4. 倒尽KOH，膜用500 ml TN缓冲液浸泡5 min 以中和残余的KOH，用500 ml 1 mol/l Tris·Cl（pH7.0）浸泡5 min，再用500 ml 水浸洗2次，每次5 min，用塑料包装膜包好PVDF膜，使用经预闪光致敏的X光片和增感屏，在-70℃进行自显影过夜。