1.  按“Laemmli凝胶电泳法”步骤1~4配制及灌制分离胶，同时凝胶应灌至玻璃平板夹层的顶部，按“Laemmli凝胶电泳法”步骤7，插入样品梳，并让凝胶在室温聚合30 ~60 min。

2.  蛋白质样品与2×磷酸/SDS样品缓冲液按1：1混合，于100℃加热2 min。

3.  按“Laemmli凝胶电泳法”步骤9~3，组装电泳装置和加样，缓冲系统采用磷酸/SDS电极缓冲液，如有空出的加样孔，加入等量的1×磷酸/SDS样品缓冲液。

4.  连接电源进行电泳，对于0.75 mm 厚的凝胶，先以15 mA 电流电泳至示踪染料进入凝胶，在30 mA 下电泳3 h，5 h，8 h或直至染料到达凝胶的底部为止。可能的话，使用温度控制装置以保持凝胶温度在15~20℃。

5.  参照“Laemmli凝胶电泳法”步骤15~18，拆卸电泳装置并取出凝胶。