1.  用10倍柱床的已脱气的水冼去柱子的贮存溶剂，并以10倍体积的高盐缓冲液在低pH洗硅胶类或聚合体IEX柱。

2.  如按前述阴离子方案分离，那么应用磷酸钠和磷酸钠/NaCl缓冲液分离蛋白标准，采用以下液体进行梯度洗脱：20 min 以上的0%~80%磷酸钠/NaCl缓冲液线性梯度或用复含梯度：0 min 时10%磷酸钠/NaCl，15 min 时60%，20 min 时80%，并保持5 min，然后在10 min 以上的时间回复到10%外，在进行下次层析前，保持10%缓冲液15 min。