蛋白质的生物合成标记实验-甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞

1.  在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞(0.5~2×10 7 )至70%~90%汇片,吸去培养液,用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。

2.  加入5 ml 于37℃短时间标记培养基,在5%CO 2 的加湿培养箱于37℃温育15 min,以耗尽细胞内的甲硫氨酸。

3.  制备[ 35 S]甲硫氨酸工作液。

4.  除去细胞上的培养液,加入2~4 ml [ 35 S]甲硫氨酸工作液,在5%CO 2 的加湿培养箱于37℃温育30 min~3 h。


5.  除去细胞上的培养液,用10 冰冷PBS缓冲液洗细胞1次后弃去,加入10 ml 冰冷PBS刮下培养皿上的细胞。
6.  将细胞悬液移至15 ml 圆锥试管,于4℃ 300 g 离心5 min,弃上清。

7.  处理和分析细胞。

2014-12-12