蛋白质的生物合成标记实验-甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记

1.  准备和用[ 35 S]甲硫氨酸标记细胞,用0.2~1 mCi/ml 的[ 35 S]甲疏氨酸脉冲标记细胞5~30 min。
2.  脉冲标记后,除去[ 35 S]甲硫氨酸培养基,用10 ml 于37℃追加培养基冼细胞1次,加入10 ml 追加培养基继续培养。
3.  在37℃温育至设定时间。悬浮培养细胞在盖紧盖子的试管中旋转温育,贴附培养细胞在37℃ 5%CO 2 的加湿培养箱中培养。

4.  于4 ℃300 g 离心收集悬浮培养细胞,弃上清。

5.  刮下贴附培养细胞,并移入15 ml 圆锥试管,300 g 离心5 min,弃上清。用10 ml 冰冷PBS缓冲液洗1次,重复离心。

6.  处理及分析细胞。

2014-12-12