杂交探针的检测实验-基本方案2

1.  在42℃~45℃水浴溶化小份稀释的胶乳10 min,将胶乳倒入或吸入洁净的玻片包装盒中(浸泡盒)。

2.  将玻片缓慢并轻柔地浸入浸泡盒中,缓慢取出并垂直放置在试管架上或将玻片置于干燥器中2 h,使其干燥。

3.  将充分干燥的载玻片放入有干燥剂的闭光玻片盒中,以黑色电工胶带封盒,铝箔覆盖,于4℃曝光(勿在用于贮存 32 P或有机溶剂的冰箱中曝光)。


4.  分别加显影液、水、和定影液于广口瓶中,并放入15~20℃水浴,由冰箱中取出玻片使温度与显影液温度相同。

5.  将载玻片移至玻片架上,在暗室中按以下程序进行显影(以计时钟准确计时):显影液中浸泡2.5 min,水中浸泡30 s,定影液中浸泡3 min(勿剧烈搅动)。

6.  无需避光,以柔缓的冷自来水浸洗玻片10~15 min,再以冷蒸溜水洗1次。载玻片干燥之前,以剃须刀片刮去玻片背面乳胶,然后于无尘处干燥。

7.  按试验要求进行玻片复染,并加盖洁净的盖玻片,在暗视野显微镜下观察显影的银颗粒显像,在黑背景上显像呈白色斑点。

2014-12-12