融合蛋白化学降解实验-备选方案1

1.  进行预试验以确定最短保温反应时间。将50 μl 1 mg/ml 融合蛋白与50 μl 2×羟胺裂解缓冲液混合在1.5 ml 微量离心管中,45℃温育反应。
2.  在0、2、4、8、16和24 h 的反应时刻,分别取10 μl 反应混合物与10 μl 2×SDS样品缓冲液混匀,干冰中冻存直至所有时刻的样本收集完毕。

3.  在沸水浴中将所有样品加热10 min,加样于SDS-聚丙烯酰胺凝胶,电泳分析其裂解程度。

4.  确定得到最大程度裂解所需的最短温育反应时间。

2014-12-12