1. 分析步骤
称取10.O g样品加6 mL缓冲溶液均质2 min,再加入8 mL缓冲溶液,37 ℃过夜。在4 ℃ 4000 r/min离心15 min,取出上清液,样品中再加入8 mL缓冲溶液,同上操作。合并上清液。
上清液用2 × 10 mL正己烷脱脂两次,弃去正己烷,剩余溶液调pH值到6.0,然后过Extrulet NT20柱,平衡20 min后,加入20 mL乙酸乙酯-叔丁基甲醚(1 + 1) 平衡20 min后,洗脱至离心瓶,再加入20 mL乙酸乙酯-叔丁基甲醚重复洗脱1次,洗脱液35 ℃以下旋转蒸发至近干,转移至5 mL具塞玻璃离心管用氮气吹干。
加入50 uL异辛烷和150 uL BSA,涡旋混合器混匀,50 ℃恒温水浴衍生化60 min,定容到10000 L,供气相色谱、质谱测定。
2. 色谱测定条件
色谱柱 I : 30 m × 0.25 mm × 0.25 um,DB-5MS, FinniganGCQ (离子阱), 用于NCI和MS/MS测定。
色谱柱 n :30 m × 0.25 mm × 0.25 um,DB-1, Hewlett Packard GC/MSD 用于 EI/MS测定。
进样口温度程序:60 ℃(1.5 min),12 ℃/min, 144 ℃,5 ℃/min, 184 ℃,25 ℃/min,290 ℃(6 min);
载气:氦气,恒压模式,柱头压10 psi;不分流进样。
3. 质谱条件
电离源:EI;
传输线温度:280 ℃;
溶剂延迟:5 min;
离子源温度:150 ℃;
四极杆温度:100 ℃。
选择离子监测:二硝基咪唑(DMZ)监测离子 m/z:141、112、98;异丙硝唑(IPZ)监测离子 m/z:169、154、123;罗硝唑(RNZ)监测离子 m/z:214、 168、167、153;异丙硝唑代谢物(IPZOH)监测离子 m/z:242、226、196、 184;甲硝唑(MNZ)监测离子 m/z:228、197、182、167;甲硝唑代谢物(MNZOH)监测离子 m/z:316、315、314、272。