1. 酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套Buffer。
2. 在离心管中加入如下成分:
10×Buffer 1μl
待切样品 xμl
酶 0.5-1μl
————————————
加水补足10μl
3. 混匀样品并短暂离心使样品沉于管底。
4. 将离心管置于37℃中温育1-3hr,若待切样品为PCR 产物,则可将反应时间适当延长。
5. 用未酶切的质粒作为对照,琼脂糖电泳鉴定酶切结果。
注:当酶切样品用于回收而不是鉴定时,可按比例适当加大反应体积。双酶切可选用二者活性都较高的Buffer 或者通用Buffer,但要注意不能有星反应。