细胞周期测定实验-细胞计数法

体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。
分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比,它是测定细胞 周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
一、Giemsa染液配制

称Giemsa粉末0.5 g,加几滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油总量为33 ml)。56℃中保温90-120分钟。加入33 ml甲醇,置棕色瓶中保存,此为Giemsa原液。使用时按要求用PBS稀释。一般稀释10倍。

一、消化细胞 ,将细胞 悬液接至内含盖玻片的培养皿中。
二、CO 2 培养箱中培养48小时,使细胞长在盖片上。
三、取出盖片,按下列顺序操作:
PBS漂洗3分钟→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。
四、盖片晾干后反扣在载玻片上,镜检。
五、计算

分裂指数=分裂细胞 数/总细胞 数×100%
注意事项
1.  操作时动作要轻,以免使盖片上的细胞脱落。

2014-12-12