吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
1)嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;
2)细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;
3)中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均分布蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色 偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用玻片必须清洁,无酸碱污染。配制必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
用途:适合大多数细胞组织的染色,包括血涂片、各种组织石蜡切片、冰冻切片、以及各种培养细胞。染色体显带、多种微生物的鉴别染色和细胞凋亡的检测等。
一、试剂配制
1. 瑞氏染液配制
称瑞氏染料0.1 g于研钵,少量多次加入AR级甲醇至完全溶解,后补充至60 ml棕色瓶密封保存,可加3 ml甘油防止挥发。
2. 吉姆萨染液配制
0.1 g吉姆萨染料放入有6.6 ml甘油的圆锥烧瓶内,56度,水浴90-120 min,当染料与甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇,充分摇匀后过滤,棕色瓶室温可保存一周。
二、染色
1. 收集细胞制成悬液后涂片、晾干。悬浮培养细胞离心收集。贴壁细胞可直接培养在载玻片上。组织取材需机械零散。
2. 固定:以甲醇固定10 min.
3. 液化精液2 000/ rmin 离心10 min,等渗盐水洗3遍,涂片后自然干燥。
4. 临用前,瑞、吉染液按10:1混合,染色30-60 s。
5. 加等量PBS(pH6.9),再染10 min。
6. 自来水冲洗,自然干燥后,即可镜检,也可直接香柏油兼做透明与封片。