细胞增殖生长方面实验-细胞计数法

测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。

一般过程为

1.  接种21 孔/24 孔板细胞(

如用培养瓶时则21 瓶)。

2.  分7 组,每组3 孔(或瓶),培养一周(7 天),期间逐日检测一
组,计数。

3.  把7 天中的细胞数值绘成图,即为细胞生长曲线。
1.  悬液制备

取待测生长状态良好细胞,增长至接近汇合时,向培养瓶内加1 ml
升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃温箱中消化,至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加 新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数;

2.  接种

向每孔中接种等量细胞,置温箱中培养;把培养瓶中营养液倒入试管中
并记录下毫升量;

3.  计数检测

从次日起,即开始检测第一组每个孔(或瓶)中的细胞总数,用计算
盘或用细胞自动计数器计数,取3 个孔的均值,如此至第7 组结束;

4.  绘图

用座标图纸绘成生长曲线。
注意事项
1.  计数法简便易行,但不够精确,约有20 %~30 %的误差。为提高准确性, 每孔也应计算2~3 次,则总和每组计算总次数达6 次~12 次,均值可能更为精确。

2.  细
胞数量增加1 倍的时间称倍增时间,亦可从细胞生长曲线中测知。

2014-12-12