测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。
一般过程为
1. 接种21 孔/24 孔板细胞(
如用培养瓶时则21 瓶)。2. 分7 组,每组3 孔(或瓶),培养一周(7 天),期间逐日检测一 组,计数。
3. 把7 天中的细胞数值绘成图,即为细胞生长曲线。
1. 悬液制备
取待测生长状态良好细胞,增长至接近汇合时,向培养瓶内加1 ml 升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃温箱中消化,至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加 新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数;
2. 接种
向每孔中接种等量细胞,置温箱中培养;把培养瓶中营养液倒入试管中 并记录下毫升量;
3. 计数检测
从次日起,即开始检测第一组每个孔(或瓶)中的细胞总数,用计算 盘或用细胞自动计数器计数,取3 个孔的均值,如此至第7 组结束;
4. 绘图
用座标图纸绘成生长曲线。
取待测生长状态良好细胞,增长至接近汇合时,向培养瓶内加1 ml 升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃温箱中消化,至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加 新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数;
2. 接种
向每孔中接种等量细胞,置温箱中培养;把培养瓶中营养液倒入试管中 并记录下毫升量;
3. 计数检测
从次日起,即开始检测第一组每个孔(或瓶)中的细胞总数,用计算 盘或用细胞自动计数器计数,取3 个孔的均值,如此至第7 组结束;
4. 绘图
用座标图纸绘成生长曲线。
注意事项
1. 计数法简便易行,但不够精确,约有20 %~30 %的误差。为提高准确性,
每孔也应计算2~3 次,则总和每组计算总次数达6 次~12 次,均值可能更为精确。
2. 细 胞数量增加1 倍的时间称倍增时间,亦可从细胞生长曲线中测知。
2. 细 胞数量增加1 倍的时间称倍增时间,亦可从细胞生长曲线中测知。