APAAP（Alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase technique）技术的基本原理为：抗
鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的第一抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆
抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab1－Ab2-anti AP-AP的复合物。还可
通过二抗将APAAP 复合物重复叠加起来，从而使多个碱性磷酸酶标记于组织细胞上第一
抗体所识别的抗原部位，提高了敏感性。
1. 分离外周血单个核细胞（PBMC），洗涤后用含10 ％FCS PMI1640
调整细胞浓度约5×10
6
/ml
2. 自制制片机上制片，充分干燥
3. 用含丙酮-福尔马林固定液中固定30 秒钟
4. 自来水、蒸馏水依次冲洗
5. 用TBS稀释特异性McAb或阴性对照抗体（1∶50～500），
每片加30～50 μl
6. 室温湿盒孵育30 min，或4 ℃冰箱湿盒中过夜
7. 充分用TBS冲洗后，加1∶50羊（兔）抗鼠IgG（
GAM或RAM IgG）30～50 μl
8. 室温湿盒孵育30 min
9. TBS冲洗后加碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（1∶2000）复合物（APAAP）
10. TBS冲洗后可重复叠加GAM或RAM IgG和APAAP2 次，每次孵育10 min
11. 冲洗后底物液显色10～15 min
12. 自来水冲洗，苏木精衬染，光镜下观察
注意事项
1. 细胞表面抗原的强度以新鲜分离细胞制片、固定为好。若需保存最好干燥密封贮
存于-20 ℃低温冰箱中，使用前必须充分干燥后固定。
2. APAAP中碱性磷酸酶和抗碱性磷酸酶的比例非常重要，抗体浓度过高，易封闭桥 抗影响染色结果。
3. 一抗、桥抗和APAAP复合物使用的浓度视细胞表面抗原密度而定，每步洗涤要充 分。
2. APAAP中碱性磷酸酶和抗碱性磷酸酶的比例非常重要，抗体浓度过高，易封闭桥 抗影响染色结果。
3. 一抗、桥抗和APAAP复合物使用的浓度视细胞表面抗原密度而定，每步洗涤要充 分。