DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况。
1. 将固定过的细胞离心(500~1000rpm,5min)弃上清液,再用PBS洗涤2次。
2. 用PBS调整细胞浓度,每份为1×106个细胞/100μl。
3. 加入1000μl DNA 荧光染料(通常用Coulter公司提供的DNA染色试剂盒),室温下避光染色15 min。
4. 上流式细胞仪检测。
样品的制备可分析细胞周期各时相的百分比,同时可粗略观察有无凋亡细胞现象,如果用对照液(鸡红细胞)作参照标准,可进行细胞DNA倍体分析,通过DNA指数(DNA index,DI)衡量DNA的相对含量,DI可用下式计算:
DI=样品G0/G1期的均值/正常二倍体细胞G0/G1期均值