在缓冲液中匀浆细胞或组织,继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀,测定其荧光。
材料
非无菌:
缓冲液:0.05mol/LNaPO4;2.0mol/L NaCl,pH7.4 , 含 2 X l0 -3 mol/L EDTA 。
Hoechst33258;缓冲液中,100ng/ml 以上的 DNA 用 lug/ml,10~100ng/ml 则用 0.lug/ml。
操作步骤
1. 在缓冲液中用 Potter 匀浆器匀浆细胞,1X 10 5 个细胞/ml , 1min。
2. 超声处理 30s。
3. 用 Hoechst 33258 和缓冲液按 1 : 10 稀释细胞。
4. 在 492nm,激发为 356nm 处检测荧光辐射,以小牛胸腺 DNA 作为标准。