胃癌为我国高发癌症之一，培养正常人胃上皮细胞对研究胃癌癌变机理有很大应用
价值。近年来培养人的肾脏上皮、气管上皮、前列腺上皮等都有报道，但培养人胃上皮
细胞少见成功。近年我研究室通过培养90例正常胃上皮细胞初代培养获得成功，并建
成转化细胞系（Ges-1）。
一、讨论
胃上皮细胞培养中证明，多加血清并不能提高促细胞生长作用，是因血清中 除含有促细胞生长的PDGF因子外，也含有TGF-β1。我们研究证明TGF-β1有抑制上皮 细胞生长作用。但因完全培养基中含有较多促上皮生长因子，仍利于上皮细胞生长。上 皮细胞生长对ECM有依赖性，其中以N型胶原对胃上皮细胞作用更好。
培养人正常胃上皮细胞获得成功主要在于摸索到了适于胃上皮
细胞生长的条件，它们主要是
1. 胶原酶和透明质酸酶消化法并用消化细胞；
2. 应用胶 原底物培养；
3. 制备含有特定成分的培养基。
1. 胶原酶和透明质酸酶消化法并用消化细胞；
2. 应用胶 原底物培养；
3. 制备含有特定成分的培养基。
胃上皮细胞培养中证明，多加血清并不能提高促细胞生长作用，是因血清中 除含有促细胞生长的PDGF因子外，也含有TGF-β1。我们研究证明TGF-β1有抑制上皮 细胞生长作用。但因完全培养基中含有较多促上皮生长因子，仍利于上皮细胞生长。上 皮细胞生长对ECM有依赖性，其中以N型胶原对胃上皮细胞作用更好。
一、培养条件的准备
1. 基础培养基
DME/F12（Sigma 产），加庆大霉素100 U/ml，pH7.4
2. 完全培养基
（1）在基础培养基中再附加相关促细胞生长因子和其它成分
3. 细胞外基质（ECM）
4. 消化酶
二、培养程序
1. 取材
取胃溃疡或胃癌手术切除胃标本远端非病变区粘膜少许；
2. 清洗
用含庆大霉素（400 μg/ml）和二性霉素（2 μg/ml的Hanks）液漂洗后， 用钝器剥离下粘膜，剪成1 mm 3 大小；
3. 消化
在I型胶原酶和透明质酸酶中，于37 ℃中消化80 分钟；
4. 离心
收集细胞悬液，800 转/分，离心后，Hanks液漂洗两次；
5. 接种
末次离心后加入含有1 %~2 %胎牛血清的完全培养基，接种入不同孔数的 培养板中；接种量依不同实验目的而定。
细胞接种后一般在16 小时内贴壁，细胞呈多角形，成岛状或片状生长，以后逐渐 联接成片。初代培养可维持2~3 周，第一周末达高峰，最后逐渐衰退剥落。
1. 基础培养基
DME/F12（Sigma 产），加庆大霉素100 U/ml，pH7.4
2. 完全培养基
（1）在基础培养基中再附加相关促细胞生长因子和其它成分
胰岛素（Sigma 产） 5 μg/ml
转铁蛋白（Sigma 产） 10 μg/ml
新生牛脑提取物 10 μg/ml
（2）新生牛脑提取物制法
①取新生牛脑垂体110 g/mlHEPES缓冲液匀浆；
②10000 转，离心20 分钟，取上清；
③水中透析2 天，透析袋为#08667B（Fisher 产）；
④10000 转，离心20 分钟，取上清；
⑤0.22 微米微孔滤膜滤过除菌，-70 ℃贮以备用。
①取新生牛脑垂体110 g/mlHEPES缓冲液匀浆；
②10000 转，离心20 分钟，取上清；
③水中透析2 天，透析袋为#08667B（Fisher 产）；
④10000 转，离心20 分钟，取上清；
⑤0.22 微米微孔滤膜滤过除菌，-70 ℃贮以备用。
3. 细胞外基质（ECM）
IN型胶原 8 μg/ml
纤粘连蛋白 10 μg/ml
层粘连蛋白 8 μg/ml
多聚赖氨酸 0.001 ％
酵母提取物（Sigma） 5 ％
将以上混合物用弯头吸管涂于塑料培养皿表面
4. 消化酶
I型胶原酶（Sigma） 0.5 ％（用DME配）
透明质酸酶（Sigma） 0.5 ％（用DME配）
二、培养程序
1. 取材
取胃溃疡或胃癌手术切除胃标本远端非病变区粘膜少许；
2. 清洗
用含庆大霉素（400 μg/ml）和二性霉素（2 μg/ml的Hanks）液漂洗后， 用钝器剥离下粘膜，剪成1 mm 3 大小；
3. 消化
在I型胶原酶和透明质酸酶中，于37 ℃中消化80 分钟；
4. 离心
收集细胞悬液，800 转/分，离心后，Hanks液漂洗两次；
5. 接种
末次离心后加入含有1 %~2 %胎牛血清的完全培养基，接种入不同孔数的 培养板中；接种量依不同实验目的而定。
细胞接种后一般在16 小时内贴壁，细胞呈多角形，成岛状或片状生长，以后逐渐 联接成片。初代培养可维持2~3 周，第一周末达高峰，最后逐渐衰退剥落。