Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。
1. 染液制备
(2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色 瓶内。
2. 染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)
(1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染 液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;
(2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染 色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);
(3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。
3. 结果
胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色。
(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合, 研磨至无颗粒;
(2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色 瓶内。
2. 染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)
(1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染 液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;
(2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染 色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);
(3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。
3. 结果
胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色。
注意事项
1. 染色液宜现用现配,保存时间最好不超过48 小时,旧染液染色效果不
好。
2. Giemsa 对pH 极敏感,缓冲液pH 值要调准确,否则染色效果不好。
3. 用染色 缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮),这层氧化膜易附 在片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前 应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。
4. 染色完毕,应把标本浸入水中洗除染液, 或用自来水直接冲掉多余染液。
2. Giemsa 对pH 极敏感,缓冲液pH 值要调准确,否则染色效果不好。
3. 用染色 缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮),这层氧化膜易附 在片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前 应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。
4. 染色完毕,应把标本浸入水中洗除染液, 或用自来水直接冲掉多余染液。