培养细胞的染色实验-Giemsa染色法

Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。
1.  染液制备

(1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合, 研磨至无颗粒;


(2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色 瓶内。

2.  染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)

(1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染 液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;

(2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染 色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);

(3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。

3.  结果

胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色。
注意事项
1.  染色液宜现用现配,保存时间最好不超过48 小时,旧染液染色效果不 好。

2.  Giemsa 对pH 极敏感,缓冲液pH 值要调准确,否则染色效果不好。

3.  用染色
缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮),这层氧化膜易附 在片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前 应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。

4.  染色完毕,应把标本浸入水中洗除染液,
或用自来水直接冲掉多余染液。

2014-12-12