1. 检查培养基的配方,并决定需要添加何种添加剂,例如谷氨酰胺。
2. 将培养基放在超净台内,如果需要可加入其他补充物或添加剂。
3 . 如果瓶盖用聚乙烯封口,去掉聚乙烯,用 70 % 的乙醇擦洗。
4. 将瓶子打开。
5. 将各种适量的添加剂加到瓶中,并做正确稀释;如果配制 100 ml,按下列配方:
谷氨酰胺,200 mmol/L,1 ml
抗生素(如果需要使用),0.5 ml (每种各取)
血清,10 ml (10%)
(a) 每一种添加剂均用不同的移液管。
(b)加完一种添加剂后将其移到超净台的一侧,这样就知道已经加了哪种添加剂。
(c)培养基配完后,将所有的添加剂和补充物从超净台上拿走。
6. 此方案特别针对以 Hank’s 盐溶液配制的 MEM ,这种培养基含低浓度的碳酸氢钠(4 mmol/L )。如果是使用以 Earle’s盐溶液配制的 MEM 或其他高碳酸盐浓度的培养基(23 mmol/L ) , 配制后要充人 5% 的 CO 2 气体。不要向含有血清的培养基中直接充气,因为培养基起泡将从瓶颈处溢出,污染的危险性增大。
7. 将瓶子盖好。
8 . 更改标签,记录添加剂、日期并签名。
9. 将培养基保存在 4°C 或直接使用。
10. 如果是第一次使用一种新的培养基,要吸出一些放在培养瓶或培养皿中,在标准条件下培养至少 1h (最好过夜),确认 pH处于正确的水平。如果不是,调整培养基 PH ,重复上述过程,或者改变 CO 2 的浓度。
2. 改变温箱的 CO 2 浓度也会影响温箱中其他的培养基。改变 CO 2 的浓度应被视为一次性地调整, 不应该用于调整批间的变化,批间的变化最好通过加无菌的酸或碱来调整。