配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。
用于开放式容器于 CO 2 温箱中培养，或在密闭的瓶中充了 CO 2 气体，CO 2 浓度为2 % ，HCO 3 - 浓度中等。
1. 将血清和谷氨酰胺解冻，置于超净工作台内。
2. 所有曾放人水浴锅的瓶子都要擦干净后再放入超净台。
3. 加入上述“无菌溶液”所列成分。
4. 加入1 mol/L NaOH ，使 pH 达到7.2 (20°C)，孵育之后培养基的pH 将上升至7.4 (37°C ) 但如果是第1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。
2. 所有曾放人水浴锅的瓶子都要擦干净后再放入超净台。
3. 加入上述“无菌溶液”所列成分。
4. 加入1 mol/L NaOH ，使 pH 达到7.2 (20°C)，孵育之后培养基的pH 将上升至7.4 (37°C ) 但如果是第1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。
注意事项
如果需要加人其他成分，而这些成分是用水配制的，，则加入前应先从已准备好的水中取出相同体积的水；如果这些成分溶解在等渗盐溶液中，则只要加入至终体积。因为血清是等渗的，所以血清也是加人至终体积，尽管这样做会稀释培养基的营养成分。
在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO 2 的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。
在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO 2 的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。