1.  接种一个单菌落于5 ml 无菌LB培养液中，在37℃培养至饱和状态（OD ₆₀₀ ≈4）。

2.  取1.5 ml 培荞液离心20 s 沉淀用100 μl 溶液重悬并于室温静置5 min。

3.  加入200 μl NsOH/SDS溶液，混匀。于冰上放置5 min。

4.  加入150 μl 乙酸钾溶液，在旋涡混合器上搌荡2 s，于冰上放置5 min。

5.  离心3  min然后吸取0.4 ml 上清液移入干净的微量离心管中，加0.8 ml  95%乙醇，于室温静置2 minI。

6.  室温离心3 min ，用1 ml 70%的酒精清洗沉淀，然后真空干燥。

7.  沉淀用30 μl TE缓冲液重溶，保存，取2.5~5 μl进行酶切分析。