1. 在非无菌过滤装置(一次性玻璃纤维过滤器或 142 mm 可重复使用过滤器(如Pall Gelman); 5 μm孔径的一次性或可重复使用过滤器(如PallGelman Verapore );1.2 μm孔径的一次性或可重复使用过滤器(如MilliporeOpticap );0.45 μm 孔径的一次性或可重复使用过滤器(如Millipore Millipak ))中插入合适的非无菌过滤膜(如果所采用的是可重复使用的装置)。
2. 连接一个或多个预过滤器(200 mm,0.1 μm 孔径的过滤器(如 Millipak ,Millipore )。0.2μm的孔径可有效地去除细菌和真菌,但是 0.1 μm 的孔径可用于去除支原体),最后为一次性无菌过滤装置或可重复使用的装有 0.1 μm 孔径滤膜的滤器,该滤器经蠕动泵与无菌接受容器(底部有出口的无菌接受瓶)相连。
3. 将泵的接口放到血清容器(用于无菌检测的普通容器)中。
4. 打开泵,当泵湿了以后检查可重复使用的过滤装置是否有裂口;关闭泵,如果需要可将过滤架拧紧。
5. 再次打开泵继续过滤,检査是否有渗漏或堵塞。提高流速可增加过滤的速度,但可能会导致过滤器堵塞。
6. 平均收集到无菌瓶(盖着盖子、铝箔包裹的无菌瓶子)中,至少留出 20 % 的上部空间以备冷冻时的热膨胀。
7. 在整个过程的开始、中间和最后阶段收集样品进行无菌检测。
8. 将瓶子盖好,做好标记,编号。
9. 将铝箔重新包裹瓶盖,包到瓶颈以利于保存。
10. -20°C 保存,直到完成质量控制。