放线菌素D诱导HL-60细胞凋亡的观察实验-凝胶回收法

从琼脂糖凝胶电泳中回收纯化DNA 片段的试剂盒。试剂盒采用了独特的凝胶融解系统, 结合DNA 制备膜技术, 具有高效快速的特点。本试剂盒纯化DNA 片段纯度高,完整性好。可直接用于连接反应, PCR 扩增。

1.  将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下,并放入2.0 ml离心管中。

2.  按1:3的比例(凝胶质量毫克数:融胶液体积微升数)加入Extraction Buffer。(每次加入的ExtractionBuffer最大体积不宜超过1.2 ml)。 例如:100 mg凝胶应加入300 μl ExtractionBuffer。
3.  于恒温水浴或金属浴中55 ℃孵育,直到凝胶融化。 低熔点凝胶可于50 ℃孵育,一般孵育时间不多于10分钟,孵育 过程中每隔2-3分钟混匀一次。
4.  可选:按1:1的比例(凝胶质量毫克数:异丙醇体积微升数)加入异 丙醇,并混合均匀。一般大于120 bp DNA片段,不需要加异丙醇。
5.  将混合液全部转移到Spincolumn内,于6,000 g离心1分钟,并弃 去接液管内液体。 如混合液体积大于750 μl可先转移750 μl,其余的液体待离心 弃液后,再转移。
6.  向Spincolumn内加500μlExtractionBuffer,于12,000 g离心 30-60秒,并弃去接液管内液体。
7.  向Spincolumn内加650 μl WashBuffer,于12,000 g离心30- 60秒,并弃去接液管内液体。
8.  重复第7步一次。
9.  再次于12,000 rpm离心1分钟,然后将Spincolumn转移到无菌的1. 5 ml离心管中。 如不进行该步离心,则无法保证离心柱内残液被彻底清除。
10.  向Spincolumn内加50μlElutionBuffer、去离子水或TE溶液, 并于室温静置1分钟。 可根据实验的实际需要决定Elution Buffer用量。
11.  于12,000 g离心1分钟,1.5 ml离心管内溶液中含有目的DNA片 段。
12.  回收的DNA可直接用于各类下游分子生物学实验,如果不立 即使用,请保存于-20 ℃。
注意事项
1. 使用前按瓶身标签标明体积加入无水乙醇,并将其混匀。
2. 结合液用好后立即盖好盖子。
3. 本试剂盒最适洗脱液体积为50 μl,洗脱液用量可根据客户实验具体情况灵活调整。

2014-12-12