SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。

1.  烤片：68℃，20 min。

2.  常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯I 20 min ⇒ 二甲苯II 20 min ⇒ 00%酒精10 min ⇒ 100%酒精10 min ⇒ 95%酒精5 min ⇒ 80%酒精5 min ⇒ 70%酒精5 min。

3.  阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H ₂ O ₂ 37℃孵育10 min，PBS冲洗3X5 min。

4.  抗原修复：置0.01 M枸橼酸缓冲液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15-20 min），自然冷却20 min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5 min。

5.  正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗。

6.  滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5 min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗3X5 min。

7.  滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS冲洗3X5 min。

8.  DAB/H ₂ O ₂ 反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。