DNA作图实验-限制酶部分消化

1.  用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。

2.  用 32 P末端标记消化产物,5’末端可先用小牛肠碱性磷酸酶处理。

3.  用T4多核苷酸激酶进行标记。

4.  3’末端可先用大肠扞菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段或T4 DNA聚合酶来标记。
5.  用第二种内切酶消化DNA片段,通过凝胶电泳分离产物,纯化那些仅单末端带放射性标记的DNA片段。
6.  用系列稀释酶法以相对高频度切割的限制酶部分消化分离的DNA片段,电泳分离片段并进行自显影曝光。

7.  用放射性标记的DNA分子量标准,估算出片段的长度。

2014-12-12