想要搞好科研,发SCI高分文章,寻找信号通路,研究错综复杂的分子机制必不可少!根据文献报道不难发现,Western Blot是目前研究分子机制最简单且最权威的实验方法之一,但想要做出一张漂亮的Western Blot图可不简单,整个操作流程的各个环节都决定着结果是否能入导师的法眼。
如果你能憋出这么一张图,应该整个人生都能升华了···
先不要着急,我们慢慢来。人家这也是长时间累积的结果。
首先你做完一次western blot实验,如果结果是这样的:
恭喜你,你的人品太好了!
如果是这样,也还是不错的,值得拥有:
如果是这样,还是有救的,请重复一次,把杂带切掉:
如果是这样,请拨打投诉电话,这简直不忍直视啊,刀王看了都要哭了:
想要做好WB,选择一个好用的抗体是非常关键的,如果不懂得如何选择抗体
那还怎么愉快的搞科研了……
今天刀王就和大家分享下如何选择抗体,主要有以下三个办法,各有讲究:
1、 直接参考文献中使用的抗体
这个是最安全可靠的办法,但需要特别注意3点:一是文章的可靠性,要参考影响因子高于5分的文章;二是实验必须是同一类实验,别人做IHC的抗体用做WB是没有意义的;三是检测的是内源蛋白还是外源蛋白,一般只有内源蛋白的Western blot才有参考意义,但如果同时做了过表达和敲减,也是可以的。
2、 抗体搜索网站查询
这个方法必须对常见的抗体资源网站有所了解,这里就向大家推荐几个小编常用的:Biocompare、Antibodyresource、Labome、Antibodypeida,当然大家还可以问问google。无论是用哪一个网站搜索都要注意抗体名称,不要把其它无关的抗体当成了自己需要的,因为这些网站都有模糊搜索功能;二是很多抗体名称不是唯一的,搜索出来的抗体名称可能不一定是你输入的名称,但确实是你需要的抗体,因为大部分基因都是有别名的,需要看仔细了。
3、 直接上知名公司网站查询
这个方法对于初接触抗体的人来说是一件相当复杂的事情,抗体种类繁多,品牌众多,价格和质量又相差甚大。但无论什么品牌,进口还是国产,都会有用得不错的产品,也会有做不出来的产品。需要谨记,最贵的不一定就是最好的,最适合你实验的才是最好的。
在这里,根据小编多年的使用心得和大家分享一些可靠而且口碑好的抗体公司,希望对大家有所帮助。
优先推荐的是生产商且拥有国际品牌的中外合资跨国公司,主要优势有:
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国内订货到货周期短(国外公司一般3-4周,国内公司最多1周);
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售前售后服务方便到位(这一点非常重要,国外抗体咨询投诉周期一般都非常长,国内公司一般1周就可以解决,还可以免费索取一些抗体小样);
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性价比高,价格是国外的1/3左右,而且有小包装规格,近年来这些品牌也被国内外学术界认可,所以你懂的。
Proteintec Group: 总部在美国,有10000多种多抗和400多种单抗,90%以上的抗体是用重组蛋白作为抗原生产,产品数据齐全,甚至还公开了抗原序列,其品牌被国内外学术界广泛认可。
Epitomics:以兔单抗为主,是全球最早生产兔单抗的公司,产品质量过硬,数据齐全,品牌口碑很好,现已被Abcam收购。
Abgent:有10000多种多抗,几乎所有抗体都用多肽为抗原制备,品牌也还不错,现已被药明康德收购。
Abnova:一家台湾公司,抗体种类很多,涵盖物种也广,单抗种类多。
还有一些其他不错的国内公司Bioworld、SAB、Genetex等。
接着推荐一些国外知名公司,主要有2类,一类是销售型公司,自己不生产产品或者只生产一小部份产品,大部份产品来自于其他公司,如Abcam、Sigma Aldrich、Thermo Fisher、ACRIS、Merck Millipore, Novus Biologicals、NovoPro 等,另一类是生产型公司,下面简单介绍些:
Cell Signaling Technology (CST)的抗体在信号通路相关的领域具有很大的优势,其抗体几乎包涵了所有的信号通路,被文献引用频率高,深受用户好评。
BioLegend 抗体主要是面向免疫系统相关的分子以及细胞因子等,而且几乎所有抗体都可以用于流式分析。
eBioscience 抗体主要面向于免疫系统和癌症相关的分子,类似BioLegend,大部份抗体都可以用于流式分析,而且也有多种不同类型的标记的抗体。
Dako 抗体产品种类较少,但每一个都是精华,尤其是在病理诊断市场上,更是行业的金标准,免疫组化首选。
Bethyl Laboratories 是一个相当古老的公司,抗体种类不是很多,其特色在于大部份抗体都有IP实验结果,质量相当不错。
R&D Systems 成立比较早,其产品尤其在细胞因子相关分子上占有极大的优势,同时拥有配套的高质量ELISA kit,为需要进行定量研究的用户提供了极为有力的工具。
BD Biosciences 公司抗体在CD分子上做得极为全面,而且几乎所有的抗体都不同种类的标记,大部份抗体都可以用于流式分析,质量相当好。
Santa Cruz Biotechnology 抗体种类则非常多,而且针对同一个蛋白有多个抗体与其对应(主要是免疫原区段不一样),几乎所有抗体都用多肽做抗原。 Santa Cruz的品牌相当悠久,业界比较认可。
文章中涉及到的抗体搜索网站的使用方法:
Biocompare: http://www.biocompare.com/ 打开网页后在Search Product下的文本框内输入你需要的抗体的抗原名称,in后面的下拉菜单中选择"Antibodies",再search就行了。如果出来很多结果,可以用application进行限定过滤,如果出来的结果不是很多,那就可以一一查看,推荐直接访问每一条的Supplier Page,即可访问供货商的产品页面获得更多信息。
Antibodyresource:http://www.antibodyresource.com 打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称,回车后即可返回搜索结果,也可以用application以及其它选项对结果进行过滤。如果配有实验结果数据的,会出现相关的图标(但此处图标不是缩略图)。
Labome: http://www.labome.com 打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称,回车后返回系统生成的一系列关键词,选有antibody的那一个关键词即可返回抗体搜索结果.
Antibodypeida: http://www.antibodypedia.com 打开网页后直接在顶端的search box里输入你需要的抗体的抗原名称,回车后下方即返回搜索结果,界面清晰明了,但是收录的抗体公司相对较少。
常用的抗体公司网站:
国内:
Proteintech:http://wwwptglab.com/
Abgent:http://www.abgent.com.cn/
Bioworld:http://www.bioworlde.com/
SAB:http://www.sabbiotech.com/
NovoPro: http://www.novoprolabs.com
国外:
Abcam:http://www.abcam.com/
Sigma:http://www.sigmaaldrich.com/
Cell Signaling:http://www.cellsignal.com/
Santa Cruz:http://www.scbt.com/
来源:解螺旋
2016-05-26