在特定时间、特定细胞类型中有效引入体细胞突变对基因功能的研究非常重要。通过将 Cre 重组酶与人类雌激素受体（ER）的突变配体结合域（LBD）融合，得到了他莫昔芬依赖的 Cre 重组酶 CreERT。

CreERT 是一种融合蛋白，由人雌激素受体（ER）的突变配体结合域与 Cre 重组酶组成。它的活性可以由 4-羟基-他莫昔芬（OHT）诱导，但不受天然 ER 配体的影响。

在他莫昔芬诱导的 Cre-ERT 系统中，融合的 Cre 蛋白（CreER）正常情况下在细胞质中与热休克蛋白 90（HSP90）结合，HSP90的结合阻止了CreER入核。当给予他莫昔芬（tamoxifen）或 4-羟基他莫昔芬（4-OHT）等合成类固醇时，HSP90 与 CreERT 之间的相互作用被破坏，从而导致 CreERT 发生核转位，进而使 Cre 与 loxP 位点相互作用，实现对基因的编辑操作。

雌激素受体（ER，estrogen receptor）是雌酮、雌二醇等女性荷尔蒙的细胞内蛋白受体，分为核雌激素受体（包括ERα和ERβ）和膜雌激素受体（包括GPER1等）。

Cre-ER由343氨基酸的Cre蛋白与人ERα的LBD（282-595）融合而成，当ERα引入G521R突变时，Cre-ER 只响应外源的人工合成雌激素类似物（比如：Tamoxifen、4-OHT）的诱导而不受内源雌激素的干扰，这样的Cre-ER命名为 Cre-ERT，这里的T表明可以被Tamoxifen诱导。当ERα引入G400V/M543A/L544A三突变时，此时CreER对4-OHT的敏感性远高于Cre-ERT，这种突变体就是大名鼎鼎的Cre-ERT2。

参考文献

1. Metzger D, Chambon P. Site- and time-specific gene targeting in the mouse. Methods. 2001 May;24(1):71-80. doi: 10.1006/meth.2001.1159. PMID: 11327805.

2. Indra AK, Warot X, Brocard J, Bornert JM, Xiao JH, Chambon P, Metzger D. Temporally-controlled site-specific mutagenesis in the basal layer of the epidermis: comparison of the recombinase activity of the tamoxifen-inducible Cre-ER(T) and Cre-ER(T2) recombinases. Nucleic Acids Res. 1999 Nov 15;27(22):4324-7. doi: 10.1093/nar/27.22.4324. PMID: 10536138; PMCID: PMC148712.

Souce: 纽普生物    2024-10-16