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YEp365 载体 (V010176)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
YEp365
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
8405 bp
载体类型:
Yeast Plasmids
复制子:
ori
宿主:
Yeast
载体来源:
Myers AM, Tzagoloff A, Kinney DM, Lusty CJ.
拷贝数:
High copy number
启动子:
LEU2

YEp365 载体图谱

YEp3658405 bp4008001200160020002400280032003600400044004800520056006000640068007200760080008400MCSlacZLEU2LEU2 promoter2u oriAmpR promoterAmpRori

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

YEp365 载体序列

LOCUS       YEp365.        8405 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Yeast episomal vector with a LEU2 marker for construction of lacZ 
            fusions. For other reading frames, use YEp363 or YEp364.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    YEp365
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 8405)
  AUTHORS   Myers AM, Tzagoloff A, Kinney DM, Lusty CJ.
  TITLE     Yeast shuttle and integrative vectors with multiple cloning sites 
            suitable for construction of lacZ fusions.
  JOURNAL   Gene 1986;45:299-310.
  PUBMED    3026915
REFERENCE   2  (bases 1 to 8405)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   3  (bases 1 to 8405)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Gene"; 
            date: "1986"; volume: "45"; pages: "299-310"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8405
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     misc_feature    1..36
                     /label=MCS
                     /note="MCS"
                     /note="multiple cloning site"
     CDS             44..3091
                     /label=lacZ
                     /note="beta-galactosidase"
     CDS             complement(3687..4778)
                     /label=LEU2
                     /note="3-isopropylmalate dehydrogenase, required for
                     leucine biosynthesis"
     promoter        complement(4779..5183)
                     /label=LEU2 promoter
     rep_origin      complement(5184..6166)
                     /direction=LEFT
                     /label=2u ori
                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"
     promoter        6448..6552
                     /label=AmpR promoter
     CDS             6553..7410
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     rep_origin      7584..8172
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"