质粒编号
质粒名称
规格
价格
V010376
pRetroX-TRE3G
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:Doxycycline-Inducible Retroviral Vector for Controlled Gene Expression with Tet-On 3G System
- 载体名称:
- pRetroX-TRE3G
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6600 bp
- 载体类型:
- Viral Expression & Packaging Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Clontech
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- mPGK
- 感受态:
- Top10
- 培养温度:
- 37℃
pRetroX-TRE3G 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pRetroX-TRE3G 载体序列
LOCUS pRetroX-TRE3G. 6600 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Retroviral vector for doxycycline-inducible expression of a gene in
cells containing the Tet-On(R) 3G transactivator protein.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pRetroX-TRE3G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6600)
AUTHORS Clontech
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 6600)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6600
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 5..309
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 310..513
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
LTR 514..689
/label=5' LTR (truncated)
/note="truncated long terminal repeat from Moloney murine
sarcoma virus"
misc_feature 752..951
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1152..1568
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
promoter 1608..1957
/label=TRE3GV promoter
/note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be
activated by binding of Tet-On(R) 3G, optimized for
retroviral and lentiviral vectors"
misc_feature 1958..2001
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
promoter 2006..2505
/label=PGK promoter
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 2526..3122
/label=PuroR
/note="puromycin N-acetyltransferase"
LTR 3306..3731
/label=3' LTR (Delta-U3)
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
Moloney murine leukemia virus"
promoter 3997..4326
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin complement(4619..5207)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5381..6238)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(6239..6343)
/label=AmpR promoter
enhancer 6529..6600
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"