pET-16b 载体 (V011028)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pET-16b
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5711 bp
载体类型:
pET & Duet Vectors (Novagen)
复制子:
ori
载体来源:
Novagen (EMD Millipore)
拷贝数:
High copy number

pET-16b 载体载体图谱

pET-16b5711 bp60012001800240030003600420048005400tet promoterT7 terminatorMCSFactor Xa site9xHisATGRBSlac operatorT7 promoterlacI promoterlacICAP binding siteropbomoriAmpRAmpR promoter

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pET-16b 载体载体序列

LOCUS       pET-16b.        5711 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Bacterial vector for inducible expression of N-terminally 
            10xHis-tagged proteins with a Factor Xa site.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pET-16b
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5711)
  AUTHORS   Novagen (EMD Millipore)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 5711)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5711
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        10..38
                     /label=tet promoter
                     /note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
                     gene"
     terminator      complement(213..260)
                     /label=T7 terminator
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 
                     polymerase"
     misc_feature    319..335
                     /label=MCS
                     /note="MCS"
                     /note="multiple cloning site"
     CDS             complement(336..347)
                     /label=Factor Xa site
                     /note="Factor Xa recognition and cleavage site"
     CDS             complement(363..389)
                     /label=9xHis
                     /note="9xHis affinity tag"
     CDS             complement(393..395)
                     /codon_start=1
                     /product="start codon"
                     /label=start codon
                     /note="ATG"
                     /translation="M"
     RBS             complement(402..424)
                     /label=RBS
                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
     protein_bind    complement(439..463)
                     /label=lac operator
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(464..482)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     promoter        791..868
                     /label=lacI promoter
     CDS             869..1948
                     /label=lacI
                     /note="lac repressor"
     protein_bind    1964..1985
                     /label=CAP binding site
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     CDS             3263..3451
                     /label=rop
                     /note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                     number"
     misc_feature    3556..3698
                     /label=bom
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     rep_origin      complement(3884..4472)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4646..5503)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(5504..5608)
                     /label=AmpR promoter