Note:
基本信息
- 载体名称:
- pTandem-1
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 3813 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Novagen (EMD Millipore)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- CMV
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pTandem-1 质粒 (编号: V011077)序列
LOCUS pTandem-1. 3813 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Mammalian vector for the co-expression of two genes from a
bicistronic mRNA using the CMV promoter and an IRES.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTandem-1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3813)
AUTHORS Novagen (EMD Millipore)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 3813)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3813
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 56..359
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 361..560
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 679..842
promoter 911..929
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
RBS 961..983
/label=RBS
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
CDS 993..995
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 999..1016
/label=6xHis
/note="6xHis affinity tag"
CDS 1026..1070
/label=S-Tag
/note="affinity and epitope tag derived from pancreatic
ribonuclease A"
CDS 1086..1103
/label=thrombin site
/note="thrombin recognition and cleavage site"
CDS 1122..1136
/label=enterokinase site
/note="enterokinase recognition and cleavage site"
CDS 1233..1265
/label=HSV tag
/note="HSV (herpes simplex virus) epitope tag"
CDS 1272..1295
/label=8xHis
/note="8xHis affinity tag"
misc_feature 1321..1805
/label=IRES
/note="IRES"
/note="internal ribosome entry site (IRES) of the
encephalomyocarditis virus (EMCV)"
misc_feature 1806..1848
/label=MCS 2
/note="MCS 2"
/note="multiple cloning site 2"
polyA_signal 1913..1968
/label=beta-globin poly(A) signal
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal (Gil and
Proudfoot, 1987)"
terminator 2056..2103
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
rep_origin complement(2275..2862)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2878..3735)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(3736..3806)
/label=AmpR promoter
promoter 3812..3813
/label=CMV
/note="Human cytomegalovirus immediate early
enhancer/promoter"