Note:
基本信息
- 载体名称:
- pSF-CMV-PGK-FLuc
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 6394 bp
- 载体类型:
- Luciferase Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Oxford Genetics
- 筛选标记:
- Neomycin/G418(Geneticin)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- CMVd2
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pSF-CMV-PGK-FLuc 质粒 (编号: V011437)序列
LOCUS pSF-CMV-PGK-FLuc 6394 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Dual-promoter mammalian vector for strong constitutive expression of
a gene together with firefly luciferase.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pSF-CMV-PGK-FLuc
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6394)
AUTHORS Oxford Genetics
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 6394)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT The PGK promoter is typically about 10-fold weaker than the CMV
promoter.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6394
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 18..89
/label=5' beta-globin insulator
/note="insulator upstream of the human beta-globin locus
(Farrell et al., 2002)"
terminator complement(94..141)
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
polyA_signal complement(158..206)
/label=poly(A) signal
/note="synthetic polyadenylation signal"
enhancer 287..590
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 591..794
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 857..942
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
RBS 893..898
/label=Shinbe-Dalgarno ribosome binding site
/note="Shinbe-Dalgarno ribosome binding site"
misc_signal 903..909
/label=Kozak sequence
/note="Kozak sequence"
CDS 907..909
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
misc_feature 961..971
/label=stop codons
/note="stop codons"
/note="stop codons in all three reading frames"
promoter 988..1487
/label=PGK promoter
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 1498..3147
/label=luciferase
/note="firefly luciferase"
misc_feature 3158..3168
/label=stop codons
/note="stop codons"
/note="stop codons in all three reading frames"
polyA_signal complement(3200..3321)
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
terminator 3435..3482
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
terminator 3512..3648
/note="rrnG terminator"
/note="transcription terminator from the E. coli ribosomal
RNA rrnG operon (Albrechtsen et al., 1991)"
misc_feature 3693..3764
/label=3' beta-globin insulator
/note="insulator downstream of the human beta-globin locus
(Farrell et al., 2002)"
rep_origin complement(3990..4578)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
RBS 5311..5316
/label=Shine-Dalgarno ribosome binding site
/note="Shine-Dalgarno ribosome binding site"
CDS 5324..6115
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
terminator 6131..6267
/label=rrnG terminator
/note="transcription terminator from the E. coli ribosomal
RNA rrnG operon (Albrechtsen et al., 1991)"