Note: pGL3-Basic is a promoterless vector that can be used to measure the activity of promoter and enhancer sequences with a luciferase assay.
基本信息
- 载体名称:
- pGL3-Basic
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4818 bp
- 载体类型:
- Luciferase Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Promega
- 拷贝数:
- High copy number
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
产品信息
质粒编号:V011544
质粒名称:pGL3-Basic
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGL3-Basic 质粒 (编号: V011544)序列
LOCUS Exported 4818 bp DNA circular SYN 11-SEP-2025
DEFINITION Cloning vector pGL3-Basic, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4818)
AUTHORS Groskreutz DJ, Schenborn ET.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (26-JAN-1996) D.J. Groskreutz, R
REFERENCE 2 (bases 1 to 4818)
AUTHORS Kenefick K.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (05-MAR-2001) Technical Writing, Promega Corporation, 2800
Woods Hollow Road, Madison, WI 53711-5399, USA
REFERENCE 3 (bases 1 to 4818)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 4818)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 5 (bases 1 to 4818)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(26-JAN-1996) D.J. Groskreutz, R"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(05-MAR-2001) Technical Writing, Promega Corporation, 2800 Woods
Hollow Road, Madison, WI 53711-5399, USA"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
COMMENT SGRef: number: 4; type: "Journal Article"
COMMENT On Mar 5, 2001 this sequence version replaced U47295.1.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4818
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
source join(240..4818,1..239)
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
polyA_signal 79..127
/label=poly(A) signal
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 141..232
/label=pause site
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
misc_feature 240..297
/label=multiple cloning site
/note="multiple cloning site"
CDS 327..1976
/codon_start=1
/label=luciferase
/note="firefly luciferase"
/translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
polyA_signal complement(2020..2141)
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(2300..2319)
/label=RV primer4 sequencing primer binding site
/note="RV primer4 sequencing primer binding site"
rep_origin 2557
/label=ColE1-derived plasmid replication origin
/note="ColE1-derived plasmid replication origin"
rep_origin complement(2560..3148)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3322..4179)
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4180..4284)
/label=AmpR promoter
rep_origin 4311..4766
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"