我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:
- 载体名称:
- pMT/BiP/V5-His C
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 3638 bp
- 载体类型:
- Insect Cell Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Invitrogen (Life Technologies)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- MT
pMT/BiP/V5-His C 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pMT/BiP/V5-His C 载体序列
LOCUS pMT_BiP_V5-His_C 3638 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Drosophila vector for inducible high-level expression of secreted
and tagged proteins. For other reading frames, use pMT/BiP/V5-His A
or pMT/BiP/V5-His B.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pMT BiP V5-His C
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3638)
AUTHORS Invitrogen (Life Technologies)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 3638)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT To create stable cell lines, co-transfect with the drug selection
vector pCoHygro or pCoBlast.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3638
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind 379..395
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 411..833
/label=MT promoter
/note="Drosophila metallothionein promoter"
sig_peptide 851..904
/label=BiP signal sequence
/note="Drosophila BiP signal sequence"
misc_feature 905..998
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
CDS 999..1040
/label=V5 tag
/note="epitope tag from simian virus 5"
CDS 1050..1067
/label=6xHis
/note="6xHis affinity tag"
polyA_signal complement(1140..1274)
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(1418..1434)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind complement(1442..1458)
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(1466..1496)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind complement(1511..1532)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(1820..2408)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2582..3439)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(3440..3544)
/label=AmpR promoter