我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

The pBAC-3 is a baculovirus transfer plasmid with the polyhedrin promoter, encoding an N-terminal signal sequence-6xHis-thrombin-S-Tag-enterokinase cassette.

载体名称:
pBAC-3
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5474 bp
载体类型:
Insect Cell Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Novagen (EMD Millipore)
拷贝数:
High copy number
启动子:
polyhedrin
感受态:
Top10
培养温度:
37℃

pBAC-3 载体图谱

pBAC-35474 bp60012001800240030003600420048005400contains ORF603 and part of lef2polyhedrin promoterGP64 signal sequence6xHisthrombin siteS-Tagenterokinase siteMCS6xHiscontains part of ORF1629oriAmpRAmpR promoterf1 ori

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pBAC-3 载体序列

LOCUS       pBAC-3.        5474 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Baculovirus transfer plasmid with the polyhedrin promoter, encoding 
            an N-terminal signal sequence-6xHis-thrombin-S-Tag-enterokinase 
            cassette.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pBAC-3
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5474)
  AUTHORS   Novagen (EMD Millipore)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 5474)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5474
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     misc_recomb     329..1156
                     /label=baculovirus recombination region (lef2/ORF603)
                     /note="contains ORF603 and part of lef2"
     promoter        1168..1259
                     /label=polyhedrin promoter
                     /note="promoter for the baculovirus polyhedrin gene"
     sig_peptide     1266..1325
                     /label=GP64 signal sequence
                     /note="signal sequence from the baculovirus envelope 
                     glycoprotein GP64"
     CDS             1335..1352
                     /label=6xHis
                     /note="6xHis affinity tag"
     CDS             1362..1379
                     /label=thrombin site
                     /note="thrombin recognition and cleavage site"
     CDS             1383..1427
                     /label=S-Tag
                     /note="affinity and epitope tag derived from pancreatic 
                     ribonuclease A"
     CDS             1443..1457
                     /label=enterokinase site
                     /note="enterokinase recognition and cleavage site"
     misc_feature    1460..1523
                     /label=MCS
                     /note="MCS"
                     /note="multiple cloning site"
     CDS             1524..1541
                     /label=6xHis
                     /note="6xHis affinity tag"
     misc_recomb     1578..2935
                     /label=baculovirus recombination region (ORF1629)
                     /note="contains part of ORF1629"
     rep_origin      complement(3198..3786)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3960..4817)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(4818..4922)
                     /label=AmpR promoter
     rep_origin      4949..5404
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"