我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pBAC-3 is a baculovirus transfer plasmid with the polyhedrin promoter, encoding an N-terminal signal sequence-6xHis-thrombin-S-Tag-enterokinase cassette.
- 载体名称:
- pBAC-3
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5474 bp
- 载体类型:
- Insect Cell Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Novagen (EMD Millipore)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- polyhedrin
- 感受态:
- Top10
- 培养温度:
- 37℃
pBAC-3 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pBAC-3 载体序列
LOCUS pBAC-3. 5474 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980 DEFINITION Baculovirus transfer plasmid with the polyhedrin promoter, encoding an N-terminal signal sequence-6xHis-thrombin-S-Tag-enterokinase cassette. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS pBAC-3 SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 5474) AUTHORS Novagen (EMD Millipore) TITLE Direct Submission REFERENCE 2 (bases 1 to 5474) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..5474 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" misc_recomb 329..1156 /label=baculovirus recombination region (lef2/ORF603) /note="contains ORF603 and part of lef2" promoter 1168..1259 /label=polyhedrin promoter /note="promoter for the baculovirus polyhedrin gene" sig_peptide 1266..1325 /label=GP64 signal sequence /note="signal sequence from the baculovirus envelope glycoprotein GP64" CDS 1335..1352 /label=6xHis /note="6xHis affinity tag" CDS 1362..1379 /label=thrombin site /note="thrombin recognition and cleavage site" CDS 1383..1427 /label=S-Tag /note="affinity and epitope tag derived from pancreatic ribonuclease A" CDS 1443..1457 /label=enterokinase site /note="enterokinase recognition and cleavage site" misc_feature 1460..1523 /label=MCS /note="MCS" /note="multiple cloning site" CDS 1524..1541 /label=6xHis /note="6xHis affinity tag" misc_recomb 1578..2935 /label=baculovirus recombination region (ORF1629) /note="contains part of ORF1629" rep_origin complement(3198..3786) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(3960..4817) /label=AmpR /note="beta-lactamase" promoter complement(4818..4922) /label=AmpR promoter rep_origin 4949..5404 /direction=RIGHT /label=f1 ori /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow indicates direction of (+) strand synthesis"