Note:
基本信息
- 载体名称:
- pCOLA-2-DEST
- 载体抗性:
- Chloramphenicol
- 载体长度:
- 5131 bp
- 载体类型:
- Gateway Cloning Vectors
- 复制子:
- ColA ori
- 载体来源:
- Novagen (EMD Millipore)
- 拷贝数:
- High copy number
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCOLA-2-DEST 质粒 (编号: V011843)序列
LOCUS pCOLA-2-DEST. 5131 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Gateway(R) Nova bacterial destination vector with a ColA origin for
expressing proteins tagged at the C-terminus with Strep-Tag II.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCOLA-2-DEST
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5131)
AUTHORS Novagen (EMD Millipore)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 5131)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5131
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS complement(227..1039)
/label=KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
promoter complement(1040..1131)
/label=AmpR promoter
rep_origin complement(1149..1784)
/direction=LEFT
/label=ColA ori
/note="Plasmids containing the ColA origin of replication
can be propagated in E. coli cells that contain additional
plasmids with compatible origins."
protein_bind complement(1948..1969)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
CDS complement(1985..3064)
/label=lacI
/note="lac repressor"
promoter complement(3065..3142)
/label=lacI promoter
promoter 3188..3206
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 3207..3231
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
RBS 3246..3268
/label=RBS
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
CDS 3275..3277
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 3281..3298
/label=6xHis
/note="6xHis affinity tag"
protein_bind 3302..3426
/label=attR1
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter 3451..3481
/label=lac UV5 promoter
/note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation"
CDS 3535..4191
/label=CmR
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 4536..4838
/label=ccdB
/note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
protein_bind complement(4882..5006)
/label=attR2
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
CDS 5014..5037
/label=Strep-Tag II
/note="peptide that binds Strep-Tactin(R), an engineered
form
of streptavidin"
terminator 5078..5125
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"