我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pCLIP-Cas9-Nickase-TRE3G-tRFP
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 10893 bp
- 载体类型:
- CRISPR Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- transOMIC
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- TRE3G
pCLIP-Cas9-Nickase-TRE3G-tRFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCLIP-Cas9-Nickase-TRE3G-tRFP 载体序列
LOCUS V012240 10893 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Exported.
ACCESSION V012240
VERSION V012240
KEYWORDS pCLIP-Cas9(D10a)-Nickase-TRE3G-tRFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 10893)
AUTHORS transOMIC
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 10893)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10893
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 27..404
/label="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
LTR 411..668
/label="5' LTR (truncated)"
/note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 715..840
/label="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1337..1570
/label="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
CDS 1755..1799
/label="gp41 peptide"
/note="antigenic peptide corresponding to amino acids 655
to 669 of the HIV envelope protein gp41 (Lutje Hulsik et
al., 2013)"
CDS 1948..1989
/note="Protein Tat from Human immunodeficiency virus type 1
group M subtype B (isolate WMJ22). Accession#: P12509"
/label="Protein Tat"
misc_feature 2061..2178
/label="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
promoter 2244..2622
/label="TRE3G promoter"
/note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be
activated by binding of Tet-On(R) 3G"
CDS 2640..6743
/label="Cas9(D10A)"
/note="nickase mutant of the Cas9 endonuclease from the
Streptococcus pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
CDS 6744..6791
/codon_start=1
/product="bipartite nuclear localization signal from
nucleoplasmin"
/label="bipartite nuclear localization signal from nucl"
/note="nucleoplasmin NLS"
/translation="KRPAATKKAGQAKKKK"
CDS 6792..6815
/label="FLAG"
/note="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
CDS 6825..6881
/codon_start=1
/product="2A peptide from porcine teschovirus-1
polyprotein"
/label="2A peptide from porcine teschovirus-1 polyprotein"
/note="P2A"
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/translation="ATNFSLLKQAGDVEENPGP"
CDS 6882..7574
/label="TurboRFP"
/note="red fluorescent protein from Entacmaea quadricolor"
misc_feature 7602..8190
/label="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
LTR 8395..8628
/label="3' LTR (Delta-U3)"
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
HIV-1"
promoter 8724..9053
/label="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin complement(9142..9727)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(9901..10758)
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
promoter complement(10759..10863)
/label="AmpR promoter"