我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- 3xFLAG-dCas9/pMXs-neo
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 10444 bp
- 载体类型:
- CRISPR Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Fujita T, Fujii H.
- 筛选标记:
- Neomycin/G418(Geneticin)
- 拷贝数:
- High copy number
3xFLAG-dCas9/pMXs-neo 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
3xFLAG-dCas9/pMXs-neo 载体序列
LOCUS 3xFLAG-dCas9_pMX 10444 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980 DEFINITION Retroviral vector with a G418 resistance marker, encoding FLAG(R)-tagged dCas9 for engineered ChIP (enChIP) purification of specific genomic regions. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS 3xFLAG-dCas9 pMXs-neo SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 10444) AUTHORS Fujita T, Fujii H. TITLE Identification of proteins associated with an IFN-gamma-responsive promoter by a retroviral expression system for enChIP using CRISPR. JOURNAL PLoS ONE 2014;9:e103084. PUBMED 25051498 REFERENCE 2 (bases 1 to 10444) AUTHORS Fujii Lab / Addgene #51260 TITLE Direct Submission REFERENCE 3 (bases 1 to 10444) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "PLoS ONE"; date: "2014"; volume: "9"; pages: "e103084" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article" FEATURES Location/Qualifiers source 1..10444 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" LTR 22..615 /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia virus" misc_feature 678..1035 /label=MMLV Psi /note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus (MMLV)" CDS 1094..1510 /label=gag (truncated) /note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag gene lacking the start codon" misc_feature 1520..1894 /label=pol region /note="Moloney murine leukemia virus (MMLV) pol region containing the splice acceptor site" CDS 1948..1950 /codon_start=1 /product="start codon" /label=start codon /note="ATG" /translation="M" CDS 1951..2016 /label=3xFLAG /note="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an enterokinase cleavage site" CDS 2020..6123 /label=dCas9 /note="catalytically dead mutant of the Cas9 endonuclease from the Streptococcus pyogenes Type II CRISPR/Cas system" CDS 6136..6156 /codon_start=1 /product="nuclear localization signal of SV40 large T antigen" /note="SV40 NLS" /translation="PKKKRKV" promoter 6341..6670 /label=SV40 promoter /note="SV40 enhancer and early promoter" CDS 7027..7818 /label=NeoR/KanR /note="aminoglycoside phosphotransferase" LTR 7889..8482 /label=LTR /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia virus" rep_origin complement(8719..9307) /direction=LEFT /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" CDS complement(9474..10331) /label=AmpR /note="beta-lactamase" promoter complement(10332..10436) /label=AmpR promoter