我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- 3xFLAG-dCas9/pMXs-neo
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 10444 bp
- 载体类型:
- CRISPR Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Fujita T, Fujii H.
- 筛选标记:
- Neomycin/G418(Geneticin)
- 拷贝数:
- High copy number
3xFLAG-dCas9/pMXs-neo 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
3xFLAG-dCas9/pMXs-neo 载体序列
LOCUS 3xFLAG-dCas9_pMX 10444 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Retroviral vector with a G418 resistance marker, encoding
FLAG(R)-tagged dCas9 for engineered ChIP (enChIP) purification of
specific genomic regions.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS 3xFLAG-dCas9 pMXs-neo
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 10444)
AUTHORS Fujita T, Fujii H.
TITLE Identification of proteins associated with an IFN-gamma-responsive
promoter by a retroviral expression system for enChIP using CRISPR.
JOURNAL PLoS ONE 2014;9:e103084.
PUBMED 25051498
REFERENCE 2 (bases 1 to 10444)
AUTHORS Fujii Lab / Addgene #51260
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 10444)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "PLoS ONE";
date: "2014"; volume: "9"; pages: "e103084"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..10444
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
LTR 22..615
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 678..1035
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1094..1510
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
misc_feature 1520..1894
/label=pol region
/note="Moloney murine leukemia virus (MMLV) pol region
containing the splice acceptor site"
CDS 1948..1950
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 1951..2016
/label=3xFLAG
/note="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
CDS 2020..6123
/label=dCas9
/note="catalytically dead mutant of the Cas9 endonuclease
from the Streptococcus pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
CDS 6136..6156
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/note="SV40 NLS"
/translation="PKKKRKV"
promoter 6341..6670
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 7027..7818
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
LTR 7889..8482
/label=LTR
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
rep_origin complement(8719..9307)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(9474..10331)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(10332..10436)
/label=AmpR promoter