我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pLG371
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 8233 bp
- 载体类型:
- Cloning vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Gonzalez LM, Mukhitov N, Voigt CA.
pLG371 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pLG371 载体序列
LOCUS 62056_14085 8233 bp DNA circular SYN 16-DEC-2019 DEFINITION Cloning vector pLG371, complete sequence. ACCESSION MN443782 VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 8233) AUTHORS Gonzalez LM, Mukhitov N, Voigt CA. TITLE Resilient living materials built by printing bacterial spores JOURNAL Nat. Chem. Biol. (2019) In press PUBMED 31792444 REFERENCE 2 (bases 1 to 8233) AUTHORS Mukhitov N, Gonzalez LM, Voigt CA. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (11-SEP-2019) Biological Engineering, MIT, NE47-140, 500 Tech Square, Cambridge, MA 02139, USA REFERENCE 3 (bases 1 to 8233) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nat. Chem. Biol. (2019) In press" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (11-SEP-2019) Biological Engineering, MIT, NE47-140, 500 Tech Square, Cambridge, MA 02139, USA" COMMENT ##Assembly-Data-START## Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing ##Assembly-Data-END## FEATURES Location/Qualifiers source 1..8233 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 106..210 /label=AmpR promoter CDS 211..1068 /label=AmpR /note="beta-lactamase" rep_origin 1242..1830 /label=ori /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of replication" misc_feature 2963..4138 /label=similar to AmyE /note="similar to AmyE" gene complement(4263..5045) /gene="specR" /label=specR terminator 5341..5427 /label=rrnB T1 terminator /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB gene" terminator 5446..5473 /label=rrnB T2 terminator /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB gene" protein_bind 5574..5601 /label=CuO /note="CymR-binding P2 operator sequence from the p-cmt operon of Pseudomonas putida (Mullick et al., 2006)" regulatory 5606..5634 /label=pSpank /note="pSpank" /regulatory_class="promoter" misc_binding 5635..5666 /label=CymO binding site /bound_moiety="CymO" misc_RNA 5668..5718 /label=sTRSV HHRz /note="hammerhead ribozyme from the tobacco ringspot virus satellite RNA (Khvorova et al., 2003)" regulatory 5749..5760 /label=SpoVG /note="SpoVG" /regulatory_class="ribosome_binding_site" CDS 5769..6476 /label=yeGFP /note="yeast-enhanced green fluorescent protein" terminator 6532..6626 /label=lambda t0 terminator /note="transcription terminator from phage lambda" regulatory 6734..6804 /label=Ppen /note="Ppen" /regulatory_class="promoter" regulatory 6812..6828 /label=SpoVG /note="SpoVG" /regulatory_class="ribosome_binding_site" CDS 6829..7437 /label=CymR /note="cumate repressor (Mullick et al., 2006)" misc_feature 7599..8233 /label=similar to AmyE /note="similar to AmyE"