质粒编号
质粒名称
规格
价格
V017494
pCBC-DT3T4
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Bacterial Resistance(s)Chloramphenicol, 25 μg/mL. Used as CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; used as template for making expression cassette with multiple gRNA target sites.
- 载体名称:
- pCBC-DT3T4
- 载体抗性:
- Chloramphenicol
- 载体长度:
- 3656 bp
- 载体类型:
- Plant Expression, CRISPR
- 载体来源:
- Qi-Jun Chen
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- U6
- 感受态:
- DH5alpha
- 培养温度:
- 37℃
pCBC-DT3T4 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCBC-DT3T4 载体序列
LOCUS Exported 3656 bp DNA circular SYN 29-JUN-2024
DEFINITION CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; used as
template for making expression cassette with multiple gRNA target
sites.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCBC-DT3T4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3656)
AUTHORS Xing HL, Dong L, Wang ZP, Zhang HY, Han CY, Liu B, Wang XC, Chen QJ
TITLE A CRISPR/Cas9 toolkit for multiplex genome editing in plants.
JOURNAL BMC Plant Biol. 2014 Nov 29;14(1):327.
PUBMED 25432517
REFERENCE 2 (bases 1 to 3656)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "BMC Plant
Biol."; date: "2014-11-29"; volume: "14(1)"; pages: "327"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3656
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind 235..254
/label=CAT-R
/note="Chloramphenicol resistance gene, reverse primer"
CDS complement(669..971)
/codon_start=1
/gene="ccdB"
/product="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
/label=ccdB
/note="Plasmids containing the ccdB gene cannot be
propagated in standard E. coli strains."
/translation="QFKVYTYKRESRYRLFVDVQSDIIDTPGRRMVIPLASARLLSDKV
SRELYPVVHIGDESWRMMTTDMASVPVSVIGEEVADLSHRENDIKNAINLMFWGI"
primer_bind complement(771..790)
/label=ccdB-fwd
/note="ccdB gene, forward primer"
primer_bind 1094..1116
/label=M13/pUC Forward
/note="In lacZ gene"
primer_bind 1108..1125
/label=M13 Forward
/note="In lacZ gene. Also called M13-F20 or M13 (-21)
Forward"
primer_bind 1109..1125
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind 1132..1151
/label=T7
/note="T7 promoter, forward primer"
promoter 1132..1150
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_RNA complement(1808..1883)
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
promoter complement(1954..1972)
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
primer_bind complement(1955..1972)
/label=SP6
/note="SP6 promoter, forward primer"
primer_bind complement(1990..2006)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
primer_bind complement(1990..2006)
/label=M13 Reverse
/note="In lacZ gene. Also called M13-rev"
primer_bind complement(2003..2025)
/label=M13/pUC Reverse
/note="In lacZ gene"
promoter complement(2045..2092)
/label=EM7 promoter
/note="synthetic bacterial promoter "
primer_bind complement(2103..2126)
/label=pENTR-F
/note="pENTR vectors, forward primer"
terminator 2134..2161
/label=rrnB T2 terminator
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2253..2339
/gene="Escherichia coli rrnB"
/label=rrnB T1 terminator
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
rep_origin complement(2504..3092)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
primer_bind complement(2584..2603)
/label=pBR322ori-F
/note="pBR322 origin, forward primer"
CDS complement(join(3317..3656,1..320))
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/label=CmR
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKSKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"