我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
pEGAD is a binary vector for transforming Arabidopsis with GFP fusions. It contains a 35S promoter, a cDNA cloning site, a Basta resistance gene and a pBIN19 backbone.
- 载体名称:
- pEGAD
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 12464 bp
- 载体类型:
- Plant Vectors
- 筛选标记:
- Neomycin/G418(Geneticin)
- 启动子:
- CaMV 35S promoter
- 载体标签:
- EGFP
- 感受态:
- Stbl3
- 培养温度:
- 37℃
pEGAD 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pEGAD 载体序列
LOCUS Exported 12464 bp DNA circular SYN 12-JUL-2024
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 12464)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..12464
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS complement(145..516)
/codon_start=1
/gene="traJ"
/product="oriT-recognizing protein"
/label=traJ
/translation="MADETKPTRKGSPPIKVYCLPDERRAIEEKAAAAGMSLSAYLLAV
GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
KQDELGKVMMGVVRPRAEP"
oriT 549..658
/note="incP origin of transfer"
CDS complement(1339..1989)
/codon_start=1
/gene="tetR"
/product="tetracycline resistance regulatory protein"
/label=TetR
/translation="MTKLQPNTVIRAALDLLNEVGVDGLTTRKLAERLGVQQPALYWHF
RNKRALLDALAEAMLAENHTHSVPRADDDWRSFLIGNARSFRQALLAYRDGARIHAGTR
PGAPQMETADAQLRFLCEAGFSAGDAVNALMTISYFTVGAVLEEQAGDSDAGERGGTVE
QAPLSPLLRAAIDAFDEAGPDAAFEQGLAVIVDGLAKRRLVVRNVEGPRKGDD"
misc_feature 2454..2478
/label=RB T-DNA repeat
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
promoter 2728..3073
/label=CaMV 35S promoter
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
CDS 3088..3804
/codon_start=1
/product="the original enhanced GFP (Yang et al., 1996)"
/label=EGFP
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
terminator 3960..4212
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
promoter 4500..4845
/label=CaMV 35S promoter
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
CDS 4862..5413
/codon_start=1
/gene="Streptomyces hygroscopicus bar"
/product="phosphinothricin acetyltransferase"
/label=BlpR
/note="confers resistance to bialophos or phosphinothricin"
/translation="MSPERRPADIRRATEADMPAVCTIVNHYIETSTVNFRTEPQEPQE
WTDDLVRLRERYPWLVAEVDGEVAGIAYAGPWKARNAYDWTAESTVYVSPRHQRTGLGS
TLYTHLLKSLEAQGFKSVVAVIGLPNDPSVRMHEALGYAPRGMLRAAGFKHGNWHDVGF
WQLDFSLPVPPRPVLPVTEI"
terminator 5436..5688
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
primer_bind complement(5697..5713)
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
misc_feature 6331..6355
/label=LB T-DNA repeat
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS complement(7951..9099)
/codon_start=1
/product="trans-acting replication protein that binds to
and activates oriV"
/label=trfA
/translation="MNRTFDRKAYRQELIDAGFSAEDAETIASRTVMRAPRETFQSVGS
MVQQATAKIERDSVQLAPPALPAPSAAVERSRRLEQEAAGLAKSMTIDTRGTMTTKKRK
TAGEDLAKQVSEAKQAALLKHTKQQIKEMQLSLFDIAPWPDTMRAMPNDTARSALFTTR
NKKIPREALQNKVIFHVNKDVKITYTGVELRADDDELVWQQVLEYAKRTPIGEPITFTF
YELCQDLGWSINGRYYTKAEECLSRLQATAMGFTSDRVGHLESVSLLHRFRVLDRGKKT
SRCQVLIDEEIVVLFAGDHYTKFIWEKYRKLSPTARRMFDYFSSHREPYPLKLETFRLM
CGSDSTRVKKWREQVGEACEELRGSGLVEHAWVNDDLVHCKR"
CDS complement(9398..10192)
/codon_start=1
/gene="aphA-3"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin"
/translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKM
TDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEYED
EQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWEEDT
PFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIA
FCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"
mobile_element 10384..11151
/mobile_element_type="insertion sequence:IS1"
/label=IS1
/note="prokaryotic transposable element"
rep_origin join(11772..12464,1..18)
/label=oriV
/note="incP origin of replication"