pRECas1 质粒 (编号: V017498)

Note: The pRECas1 system is a versatile CRISPR-Cas9 gene editing platform designed for widespread use in Clostridia and other anaerobic Gram-positive species. It includes five vectors, collectively referred to as pRECas1. A component of this system, RiboCas, features the Cas9 enzyme regulated by a precisely controlled, theophylline-responsive riboswitch. This innovative approach addresses many challenges associated with Cas9 toxicity in both the shuttle host and target organisms.

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基本信息

载体名称:: pRECas1

载体抗性:: Chloramphenicol

载体长度:: 8842 bp

载体类型:: CRISPR Plasmids

载体来源:: Cañadas IC, Groothuis D, Zygouropoulou M, Rodrigues R, Minton NP.

启动子:: Pfdx

感受态:: DH10b

培养温度:: 37℃

产品信息

质粒编号:V017498

质粒名称:pRECas1

规格:5 μg (冻干粉)

下载资源

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

参考文献

Zhou P, G C B, Stolte F, Wu C. Use of CRISPR interference for efficient and rapid gene inactivation in Fusobacterium nucleatum. Appl Environ Microbiol. 2024 Feb 21;90(2):e0166523. doi: 10.1128/aem.01665-23. Epub 2024 Jan 8. PMID: 38185820; PMCID: PMC10880640.

Poulalier-Delavelle M, Baker JP, Millard J, Winzer K, Minton NP. Endogenous CRISPR/Cas systems for genome engineering in the acetogens Acetobacterium woodii and Clostridium autoethanogenum. Front Bioeng Biotechnol. 2023 Jun 23;11:1213236. doi: 10.3389/fbioe.2023.1213236. PMID: 37425362; PMCID: PMC10328091.

Dykstra JC, van Oort J, Yazdi AT, Vossen E, Patinios C, van der Oost J, Sousa DZ, Kengen SWM. Metabolic engineering of Clostridium autoethanogenum for ethyl acetate production from CO. Microb Cell Fact. 2022 Nov 23;21(1):243. doi: 10.1186/s12934-022-01964-5. PMID: 36419165; PMCID: PMC9686113.