pRECas1-p15a 载体 (V017499) COA报告测序报告

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

A universal CRISPR_Cas9 gene editing system for broad application in Clostridia and other anaerobic Gram+ species, comprising 5 vectors. This is pRECas1-p15a. In RiboCas, Cas9 has been placed under the control of a tightly regulated, theophylline responsive riboswitch. The system overcomes many of the issues relating to Cas9 toxicity in both the shuttle host and intended target.

载体名称:: pRECas1-p15a

载体抗性:: Chloramphenicol

载体长度:: 8647 bp

载体类型:: CRISPR Plasmids

载体来源:: Cañadas IC, Groothuis D, Zygouropoulou M, Rodrigues R, Minton NP.

启动子:: Pfdx

感受态:: Top10

培养温度:: 37℃

pRECas1-p15a 载体图谱

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质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pRECas1-p15a 载体序列

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LOCUS       Exported                8647 bp DNA     circular SYN 04-SEP-2024
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pRECas1-p15a
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 8647)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8647
                     /label=source
                     /organism="synthetic DNA construct"
     terminator      3..56
                     /label=terminator
     primer_bind     57..73
                     /label=M13 rev
     CDS             complement(112..4218)
                     /codon_start=1
                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 
                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
                     /label=Cas9
                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"
                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK
                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES
                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK
                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL
                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ
                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR
                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL
                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG
                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY
                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD
                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER
                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM
                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR
                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY
                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP
                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH
                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL
                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT
                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK
                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI
                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE
                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD
                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL
                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"
     misc_feature    4219..4471
                     /label=Pfdx-E
     misc_feature    4478..4746
                     /label=p1339 (Cac araE)
     misc_feature    4753..4755
                     /label=sgRNA insertion site
     misc_feature    4762..4764
                     /label=HA insertion site
     misc_feature    4767..6391
                     /label=pCB102
     gene            6480..7103
                     /label=catP
     rep_origin      7201..7746
                     /direction=RIGHT
                     /label=p15A ori
                     /note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A 
                     origin of replication can be propagated in E. coli cells 
                     that contain a second plasmid with the ColE1 origin.
                     "
     oriT            7994..8103
                     /note="incP origin of transfer"
     CDS             8136..8507
                     /codon_start=1
                     /gene="traJ"
                     /product="oriT-recognizing protein"
                     /label=traJ
                     /translation="MADETKPTRKGSPPIKVYCLPDERRAIEEKAAAAGMSLSAYLLAV
                     GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
                     KQDELGKVMMGVVRPRAEP"

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