Note: pYM35 is a pYM-series yeast cassette plasmid providing C-terminal DsRed1 red fluorescent protein tagging with kanMX4 (G418) selection (Janke et al. 2004). The ~2.5-kb S2/S3 PCR product integrates at the target locus, tagging chromosomal proteins with red fluorescence at endogenous levels.
基本信息
- 载体名称:
- pYM35
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4866 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 载体来源:
- Janke C et al.
- 启动子:
- TEF
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
产品信息
质粒编号:V017506
质粒名称:pYM35
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
参考文献
- Janke C, Magiera MM, Rathfelder N, et al. A versatile toolbox for PCR‐based tagging of yeast genes: new fluorescent proteins, more markers and promoter substitution cassettes. Yeast. 2004;21(11):947-962 doi: 10.1002/yea.1142
- Knop M, Siegers K, Pereira G, et al. Epitope tagging of yeast genes using a PCR-based strategy: more tags and improved practical routines. Yeast. 1999;15(10B):963-972 doi: 10.1002/(sici)1097-0061(199907)15:10b<963::aid-yea399>3.0.co;2-w
pYM35 质粒 (编号: V017506)序列
LOCUS Exported 4866 bp DNA circular SYN 22-NOV-2024
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION P30247
VERSION .
KEYWORDS pYM35
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4866)
AUTHORS Self
JOURNAL Unpublished.
REFERENCE 2 (bases 1 to 4866)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName:
"Unpublished."
COMMENT A versatile toolbox for PCR-based tagging of yeast genes: new
fluorescent proteins, more markers and promoter substitution
cassettes. Janke C, Magiera MM, Rathfelder N, Taxis C, Reber S,
Maekawa H, Moreno-Borchart A, Doenges G, Schwob E, Schiebel E,
Knop M. Yeast (2004) 21, 947 - 962
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4866
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS 79..759
/codon_start=1
/product="wild-type DsRed"
/label=DsRed1
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVRSSKNVIKEFMRFKVRMEGTVNGHEFEIEGEGEGRPYEGHNTV
KLKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKVYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVMNFEDGG
VVTVTQDSSLQDGCFIYKVKFIGVNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGVLKGEIH
KALKLKDGGHYLVEFKSIYMAKKPVQLPGYYYVDSKLDITSHNEDYTIVEQYERTEGRH
HLFL"
terminator 781..968
/gene="S. cerevisiae ADH1"
/label=ADH1 terminator
/note="transcription terminator for the S. cerevisiae
alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"
gene 1043..2399
/label=kanMX
/note="yeast selectable marker conferring kanamycin
resistance (Wach et al., 1994)"
promoter 1043..1386
/label=TEF promoter
/note="Ashbya gossypii TEF promoter"
CDS 1387..2196
/gene="kanMX"
/label=kanMX
terminator 2202..2399
/label=TEF terminator
/note="Ashbya gossypii TEF terminator"
promoter complement(2504..2522)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(2780..3368)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3539..4399)
/gene="AmpR"
/label=AmpR
promoter complement(4400..4504)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter join(4850..4866,1..2)
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"