pExchange_tdk_BT1311p-tetR-1 载体 (V018095)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pExchange_tdk_BT1311p-tetR-1
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
7210 bp
载体类型:
Protein expression, Tetracycline inducible
复制子:
R6K γ ori
宿主:
Bacteria
筛选标记:
Ery
启动子:
BT1311
3'引物:
AmpNR
感受态:
Pir1
培养温度:
37℃
表达方法:
Tetracycline induction

pExchange_tdk_BT1311p-tetR-1 载体图谱

pExchange_tdk_BT1311p-tetR-17210 bp300600900120015001800210024002700300033003600390042004500480051005400570060006300660069007200AmpRTetRR6K γ orioriT

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pExchange_tdk_BT1311p-tetR-1 载体序列

LOCUS       .                       7210 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     CDS             complement(33..890)
                     /label="AmpR"
                     /note="β-lactamase"
     CDS             4713..5333
                     /label="TetR"
                     /note="tetracycline repressor TetR"
     rep_origin      complement(6441..6829)
                     /label="R6K γ ori"
                     /note="γ replication origin from E. coli plasmid R6K;
                     requires the R6K initiator protein pi for replication"
     oriT            7000..7109
                     /label="oriT"
                     /note="incP origin of transfer"